DESARROLLO DE METODOS DE DIAGNÓSTICO MOLECULAR PARA LA DETECCIÓN DE PATÓGENOS VIRALES FELINOS – KELLER, et. al.

DESARROLLO DE METODOS DE DIAGNÓSTICO MOLECULAR PARA LA DETECCIÓN DE PATÓGENOS VIRALES FELINOS
KELLER, Leticia2; PERIOLO, Osvaldo1; LOPEZ, Nora1; LA TORRE, José1; D’ANTUONO, Alejandra1. 1Instituto de Ciencia y Tecnología Dr. Cesar Milstein, CONICET 2 Fundación de Estudios en Virología Animal

XIV CONGRESO NACIONAL DE AVEACA – XI CONGRESO FIAVAC Bs. As. 11 y 12 de Setiembre de 2014 Asociación de Veterinarios Especializados en Animales de Compañía de Argentina
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El Complejo Respiratorio Felino es una patología frecuente, cuyos principales agentes etiológicos son el Herpesvirus Felino Tipo 1 o Virus de la Rinotraqueítis (HvF-1) y el Calicivirus Felino (CvF). Estos virus afectan las vías respiratorias altas, la mucosa ocular y bucal. En general el animal muestra síntomas como estornudos, congestión nasal con secreción, conjuntivitis, anorexia y fiebre. Pero la severidad de las manifestaciones clínicas varía dependiendo principalmente del estado general y del sistema inmune del gato. La infección por CvF se caracteriza por la gingivitis y estomatitis ulcerativa. Más raramente pueden aparecer cojeras. En casos de rinotraqueitis felina suele aparecer úlceras corneales y en hembras preñadas se observan abortos. Además la infección concurrente con bacterias puede complicar el cuadro. La mortalidad asociada a este síndrome suele ser baja, siendo mayor en gatos muy pequeños o inmunosupridos (30%). Otra enfermedad muy prevalente en gatos es la Panleucopenia Felina. Se caracteriza por un grave descenso de los glóbulos blancos, y destrucción de la mucosa intestinal que ocasiona diarrea. En los gatos cachorros es una de las causas principales de muerte por enfermedades infecciosas. Es provocada por el Parvovirus Felino (PvF), íntimamente emparentado con el parvovirus canino. Tanto el Complejo Respiratorio como la Panleucopenia Felina se diagnostican principalmente por sus signos clínicos. También pueden utilizarse métodos clásicos como el aislamiento viral, inmunofluorescencia indirecta y fijación de complemento, metodologías que son laboriosas y requieren mucho tiempo. Además, dependiendo del caso, estas técnicas poseen poca sensibilidad y/o especificidad y no permiten discriminar un animal vacunado de uno infectado. Dada la elevada prevalencia de las enfermedades anteriormente citadas y su impacto en la salud animal, es que el desarrollo de técnicas rápidas, específicas y sensibles que permitan la identificación inequívoca del patógeno actuante en cada caso, así como también el diagnóstico diferencial, se hace imprescindible.

El objetivo del trabajo es desarrollar y aplicar herramientas de diagnóstico molecular para la identificación y caracterización de patógenos virales, como PvF, CvF y HvF, que permitan definir rápida e inequívocamente la etiología de las enfermedades que afectan a felinos domésticos.

Con ese fin, se desarrollaron reacciones de PCR y RT-PCR por punto final utilizando DNA o RNA viral aislado a partir de vacunas comerciales polivalentes. Se emplearon oligonucleótidos específicos diseñados para amplificar parcial o totalmente regiones codificantes del genoma viral correspondiente. El análisis de los productos de amplificación fue realizado mediante electroforesis en gel de agarosa con bromuro de etidio. La identidad de los amplicones fue corroborada por secuenciación y comparación delas secuencias obtenidas con las depositadas en GenBank. Se logró la amplificación de los fragmentos génicos esperados en todas las vacunas comerciales analizadas. Específicamente, se amplificó la secuencia completa que codifica para la proteína VP2 de PvF, así como dos fragmentos de 300 pb y 250 pb correspondientes a los genes timidina quinasa y transferasa terminal, respectivamente, de HvF-1. Finalmente, se amplificó la secuencia completa del gen VP1 (2200 pb) de CvF. De estos resultados se puede concluir que las reacciones de amplificación genómica desarrolladas permiten detectar rápida y eficazmente PvF, CvF y HvF.

Estos métodos, en conjunto con el análisis de las secuencias virales amplificadas, podrían ser útiles para el diagnóstico de estos patógenos así como también para la genotipificación de las cepas de PvF y CvF circulantes en el país.

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